「消毒生產企業現場審核」現場消毒評價方法解讀

【現場消毒評價方法】編制意義

      目前，【傳染病防控】形勢依然嚴峻，一些被認為早已得到有效控制的傳染病如結核病、霍亂、麻疹等有卷土重來、死灰復燃的態勢；新發傳染病如高致病性禽流感、H7N9、埃博拉出血熱、中東呼吸綜合癥等不斷出現；生物恐怖導致的高致病性微生物也時刻威脅著人類的健康。經濟全球化帶來疫情全球化，使傳染病流行速度增快、范圍擴大、危害增強。多重耐藥菌問題已給臨床抗感染治療帶來了嚴重的挑戰，已成為重大公共衛生問題。上述面臨的形勢，均預示著未來傳染（感染）性疾病防控任重道遠。 

    【現場消毒】是切斷病原微生物傳播的重要途徑，是控制傳染病流行的重要措施之一。在實際工作中，一方面，消毒不到位或過度消毒現象時有發生；另一方面，現有消毒產品大多在實驗室環境中按照產品申報標準評價，許多數據都是基于試驗指示物而非疫源地病原微生物，現場消毒時已知實驗室結果只能起提示作用；殺菌性能又受到時間、溫濕度、濃度、pH等因素的影響，而現場環境具有多樣性，利用這些產品進行現場消毒后是否能達到安全水平無法得出準確結論。及時開展現場消毒評價，確保消毒達到合理水平，是徹底消除病原微生物，降低傳染病發病率的關鍵。目前，我國涉及消毒評價方法零星分布于不同的標準與規范中，沒有全面系統的制定現場消毒效果評價方法，特別是重大傳染病疫源地、突發公共衛生事件和重大活動衛生保障的消毒消毒評價方法不明確，且以往標準在實施過程中存在一些問題。隨著當前傳染病防控形勢日益嚴峻及我國衛生消毒管理規范化發展，建立健全統一、完善、可操作性強的現場消毒評價方法已成為傳染病防控的必然要求。

【現場消毒評價方法】編制背景

      《消毒技術規范》是我國現行消毒專業最全面和權威的參考資料，是多年來國內消毒專家的知識精華。1988年衛生部制訂發布第一版《消毒技術規范》，并于1991年、1999年、2002年進行三次修訂。這些版本均規定了疫源地消毒評價方法及標準。同時，自1995年以來，GB15981《消毒與滅菌效果評價方法與標準》、GB15982《醫院消毒衛生標準》、GB19193《疫源地消毒總則》等相繼頒布，分別規定了【紫外線消毒】表面、醫院及【疫源地消毒】標準及評價方法。近年來又相繼修訂了醫院、【疫源地消毒效果評價標準和方法】，發布了地震災區預防性消毒效果評價標準和方法。這些規范標準實施以來，在傳染病防控和醫院感染控制，促進我國消毒事業發展等工作中發揮了重要作用，但在實施過程中，也發現了一些問題，如缺少突發急性傳染病疫源地消毒效果評價方法、高致病性病原微生物引起的疫源地消毒效果評價方法、指示微生物選擇及評價上操作性不強等。為適應新形勢的需要，使其更具操作性，本標準在《消毒技術規范》（2002版）、GB19193《疫源地消毒總則》等規范標準的基礎上，對傳染病疫源地、突發公共衛生事件和重大活動衛生保障的環境和物品的消毒效果評價方法進行修改和完善。

【現場消毒評價方法】修訂依據

本標準為首次制定，是方法類標準，主要參照《消毒技術規范》（2002版）中【疫源地消毒效果微生物學評價】及GB19193《疫源地消毒總則》中消毒效果評價等內容；并根據應用實際，針對傳染病疫源地、突發【公共衛生】事件和【重大活動衛生】保障的【環境和物品消毒效果評價】的基本原則、現場消毒評價方法等提出了明確的要求。在制定過程中，嚴格按照《標準化工作指導第1部分：標準的結構和編寫》（GB/T1.1-2009）要求編寫，并遵循適應性、可操作性、普遍適用性及易于推廣的原則，以保護人群健康為基礎。

（一）術語和定義

     本標準涉及了“目標微生物”、“指示微生物”、“現場消毒”3個術語。在以往的文獻和標準中尚未有3個術語定義。“目標微生物”主要包括2個方面，一方面指在傳染病發生或流行消毒時必須要殺滅的病原微生物，如引起麻疹時的麻疹病毒、引起霍亂的霍亂弧菌等；另一方面指預防性消毒時某特定消毒對象的代表微生物，如對集中空調消毒效果評價時檢測的β-溶血性鏈球菌，對水消毒效果評價時檢測大腸桿菌等。“指示微生物”是指供消毒效果評價時使用的人工污染的微生物，此類微生物具有確定的抗力并能代表某類微生物，如進行消毒產品檢驗時所用的大腸桿菌8099、金黃色葡萄球菌ATCC6538、枯草桿菌黑色變種芽胞ATCC9372等。“現場消毒”在本標準中主要特指發生傳染病流行、突發公共衛生事件或重大活動衛生保障時對現場環境和物品進行的消毒，特指傳染病疫源地、突發公共衛生事件或重大活動衛生保障的現場。

（二）【現場消毒】評價原則

     1.基本原則。本部分內容主要參考GB19193《疫源地消毒總則》附錄中C1“疫源地消毒效果評價的總體要求”。與其相比，提出了進行現場消毒效果評價前，應先進行消毒過程評價?，F場消毒效果評價方法主要包括現場評價方法和現場模擬評價方法，現場評價方法以檢測消毒對象上自然菌或目標微生物是否存在或存在數量作為判定依據，主要用于重大活動衛生保障和目標微生物明確的傳染病疫源地、突發公共衛生事件消毒效果評價，包括對其物體表面、空氣及生活飲用水等消毒對象中自然菌的消毒效果以及傳染病疫源地、突發公共衛生事件中目標微生物的消毒效果?，F場模擬評價方法是以檢測指示微生物是否存在或存在的數量作為判定依據，主要用于對目標微生物無法檢測、不明原因的傳染病疫源地及突發公共衛生事件、風險等級較高的污染如炭疽、SARS進行的消毒效果評價。所有的評價指標均應按照文中所述殺滅對數值≥1.00或≥3.00或殺滅率≥90%外，傳染病疫源地、突發公共衛生事件還不得檢出目標微生物，此外還應符合特定場所相應標準規范，如針對公共場所的消毒效果評價，除符合本文中規定的殺滅對數值或殺滅率外，還應符合公共場所相應的標準規范。

     2.指示微生物選擇。明確提出了現場模擬消毒效果評價，應根據病原微生物對消毒因子的敏感性選擇相應的指示微生物。為使評價方法更貼近實際，與GB19193《疫源地消毒總則》相比，本標準中指示微生物選擇不再按照15981執行，而是綜合國內外標準規范及文獻綜述，選擇大腸桿菌（Escherichia coli）8099、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC6538作為親脂病毒、細菌繁殖體的指示微生物，選擇白色念珠菌（Candida albicans）ATCC10231作為致病性真菌指示微生物，選擇龜分枝桿菌膿腫亞種（Mycobacterium chelonae subsp. Abscessus）ATCC 93326作為親水病毒、人結核分枝桿菌指示微生物，選擇枯草桿菌黑色變種芽孢（Bacillus subtilis var.niger）ATCC9372作為細菌芽孢指示微生物。明確提出現場模擬評價方法已選擇抗力強的指示微生物進行評價時可以不再選擇抗力弱的指示微生物，如已知病原微生物的抗力低于細菌芽孢，但其對社會、人類造成的危害特別重大，傳染性特別強，如SARS、埃博拉出血熱等烈性急性傳染病時，為確保殺滅疫區所有病原微生物，可以選擇選擇抗力最強的枯草桿菌黑色變種芽孢ATCC9372作為指示微生物以確保消毒效果，不再選擇其他抗力弱如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、龜分枝桿菌膿腫亞種等進行評價。

     選擇以上微生物作為現場消毒效果評價指示微生物主要依據有以下幾個方面：一是GB15981《消毒與滅菌效果的評價方法與標準》涉及到了壓力蒸汽滅菌、紫外線表面及液體消毒劑等3個部分的評價指示微生物，如何選擇合理的現場消毒效果評價指示微生物操作性不強；二是現行GB15981為1995年實施，隨著20多年消毒技術的發展，已不能適應目前工作的需要。三是一般認為，微生物對消毒因子的敏感性從高到低的依次為親脂病毒、細菌繁殖體、真菌、親水病毒、分枝桿菌、細菌芽孢、朊毒。因此，根據其敏感性及《消毒技術規范》（2002年版）消毒產品微生物殺滅試驗涉及微生物的特性確定合適的指示微生物。因消毒試驗中涉及的病毒類指示微如脊髓灰質炎病毒-Ⅰ型疫苗株（Poliovirus-Ⅰ）、艾滋病病毒等因其在自然菌的存活率及危害性等特性不適宜用于現場消毒效果評價，因此針對病毒類傳染病疫情評價用指示微生物選擇其對消毒因子的敏感性高一級別的微生物對應的指示微生物替代。四是美國AOAC、歐洲等消毒產品評價殺芽孢試驗中，均規定使用以枯草桿菌芽孢（B.subtilis）為主作為指示微生物，我國《消毒技術規范》（2002年版）也將以枯草桿菌黑色變種芽孢（Bacillus subtilis var.niger）ATCC9372作為細菌芽孢的代表。

（三）現場消毒效果評價方法

     本標準規定了現場評價和現場模擬評價的基本方法，是本標準的主要內容之一。

     1.現場評價方法。規定了物體表面、空氣、生活飲用水、污水、污泥以及排泄物、嘔吐物采樣及檢測方法，主要依據《消毒技術規范》（2002年版）4.7疫源地消毒效果的微生物學評價部分及有關的標準規范。有以下幾點需要特別說明：一是物體表面采樣布點要以桌面、地面、墻面、床頭柜、便器等為重點采樣對象，在消毒因子難以達到的地方如抽屜、地毯、墻角等要增加采樣點。針對每類采樣對象采集樣本不應少于2個，采樣總數不少于30個。消毒前、后采樣點應成對設置，不得在同一區內進行。對于不規則物體或小型物體表面（如兒童、玩具、門把手、熱水瓶把等）可按實際面積采樣，結果計算以CFU/cm2或CFU/件表示。二是基于現場操作方便考慮，空氣采樣采用平板沉降法而非空氣采樣器法，此外明確規定了消毒后所用的普通營養瓊脂平板中應加入相應的中和劑，以防止消毒因子的持續作用。

     2.現場模擬評價方法。本標準明確現場消毒效果評價采用對指示微生物檢測的現場模擬評價方法，并根據病原微生物對消毒因子的敏感性選擇相應的指示微生物。所用的指示微生物的菌懸液依據《消毒技術規范》（2002年版）有關內容進行制備。其方法的選擇及相關要求基于以下幾個方面的考慮：

     （1）基于目前消毒試驗技術及有關文獻資料，現場消毒后對于空氣消毒效果評價，以物體表面模擬現場，即載體的消毒效果來替代，便于實際操作。

     （2）現場模擬評價方法規定了兩種染菌方法，即染菌法或載體法，可根據現場情況選擇。需要特別注意的是從生物安全的角度，對于死亡率較高的烈性傳染病宜選擇載體法，采樣時不宜將平皿帶出消毒現場，可用無菌鑷子將載體直接取出移入試管中進行計數存活菌數，以防止平皿被現場污染。

     （3）按照重點區域布點原則布點。規定根據現場情況，選擇桌面、地面、墻壁及墻角、書櫥、床底、屋頂、抽屜等消毒因子難以到達的地方布點，每類采樣對象采集樣本不少于2個，總布點數量不少于30個。此布點要求兼顧局部與整體。